非洲猪瘟病毒间接 ELISA 抗体检测试剂盒

非洲猪瘟抗体 ELISA 检测试剂盒 （CAT.#：E25）

1.用途

用于检测血清样品中的非洲猪瘟病毒抗体水平。

2. 原理简介 

本试剂盒采用间接 ELISA 法检测血清中的非洲 猪瘟抗体。其基本原理如下：用重组蛋白抗原制备包 被微孔板，HRP 酶标记物为抗猪 IgG。检测时，向微 孔板中加入稀释后的待测样品，洗板后，加入 HRP 标记抗体，如果血清中含有非洲猪瘟抗体，则抗体会 与酶标板上的包被的抗原结合，酶标抗体也会与血清 中的非洲猪瘟抗体结合，加入底物后，颜色反应的深 浅与样品中存在的非洲猪瘟抗体的量成正比。 

3. 试剂盒组份 

1). 包被板：96T(12 条8 孔，2 块)。

2). 酶标记物：21.0ml/瓶，1 瓶。

3). 样品稀释液：100.0ml/瓶，1 瓶。含蛋白的缓冲液， 可作为阴性质控使用。

4). 阳性质控：1.0ml/瓶，1 瓶。含有非洲猪瘟抗体。

5). 洗液：60.0ml/瓶，1 瓶。20 倍浓缩液，用前稀释。 含有非离子去垢剂。 

6). 底物 A：14.0ml/瓶，1 瓶。含有过氧化氢的缓冲 液。

7). 底物 B：14.0ml/瓶，1 瓶。含有 TMB 的缓冲液。

8). 终止液：14.0ml/瓶，1 瓶。含有硫酸的缓冲液。

9). 板贴、说明书、自封袋：1 套。

4. 非洲猪瘟病毒间接 ELISA 抗体检测试剂盒意事项

1). 不同批次的组份不可混用，且只能在效期内使 用。

2). 如果待检标本含有悬浮物、絮状物等不溶物，请 离心去除。且含有叠氮钠的标本不可用。

5. 试剂准备

1). 测试前将试剂盒组份置于室温(18-25℃)平衡 30 分钟，测试后应立即放回 2-8℃保存。 

2). 洗涤液：将浓缩洗液按照 20 倍比例用蒸馏水稀 释，混匀后备用。 

3). 样品准备：按照常规方法制备血清，用试剂盒中 配套的稀释液稀释，样品按照 1：100 稀释。（比 如：5µl 样品加入到 495µl 样品稀释液中） 

6. 检测步骤 

1). 取出所需要的板条。剩余的板条装入自封袋中， 置于 2-8℃保存。 

2). 先向每孔中加入 100µl 稀释后的待测样品、阴性 质控（样品稀释液）、阳性质控（不稀释），其中 阴性质控重复加两孔,阳性质控重复加两孔。 

3). 轻轻震动 10-20 秒混匀，贴上板贴。 

4). 置于 37℃温育 30 分钟。扣除孔中液体，并用洗 液洗涤 5-7 次。在干净的纸巾或毛巾上拍干，尽 量去除残留的水分。 

5). 每孔中加入 100µl 的酶标记物，轻轻震动 10-20 秒混匀，贴上板贴。 

6). 置于 37℃温育 30 分钟。扣除孔中液体，并用洗 液洗涤 5-7 次。在干净的纸巾或毛巾上拍干，尽 量去除残留的水分。 

7). 每孔依次加入 50µl 底物 A 和 50µl 底物 B，轻轻 震动 10-20 秒，置于 37℃避光反应 15 分钟。 

8). 每孔加入 50µl 终止液，轻轻震动几次混匀。使 蓝色液体完全变为黄色液体。

9). 在 10 分钟内，测量 450nm 处的吸光度(OD450)。 

7. 结果判断 

1). 阴阳性质控平均值计算 阳性质控平均值 =（阳性质控 1+阳性质控 

2）/2 阴性质控平均值= （阴性质控 1+阴性质控 2）/2 2). 实验有效性判定：应满足， 阳性质控平均值 – 阴性质控平均值0.500 阴性质控平均值0.400 

3). 样品 S/P 值计算： S/P=（样品 A- 阴性质控平均值）/（阳性质控平均 值 – 阴性质控平均值） 

4). 结果判定： 1 阴性：S/P0.20； 2 阳性：S/P0.20。 

8. 储存条件及效期 

2-8℃保存，有效期为 12 个月。

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